Temat: Real-time PCR, kurs, 27-28.05.2011. Warszawa

27-28 maja 2011 | Warszawa | Centrum Edukacji Medycznej CEMED
Warsztaty
Real-time PCR w oznaczeniach jakościowych i ilościowych

ZAPRASZAMY:
biologów molekularnych, biotechnologów i diagnostów laboratoryjnych (z zakresu genetyki medycznej i poradnictwa genetycznego)

Prowadzący:
• dr Marcin Hołysz notka , Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
• dr Błażej Rubiś notka , Katedra i Zakład Chemii Klinicznej i Diagnostyki Molekularnej

PROGRAM
DZIEŃ 1 | 27 maja 2011 Technika Real-time PCR - Oznaczenia ilościowe
9.55 Rozpoczęcie warsztatów 5 min
10.00 Wykład:
Podstawy techniki Real-time PCR
• podstawy techniki Real-time PCR
• formaty detekcji (sondy, barwniki, fluorochromy)
• nomenklatura związana z techniką Real-time PCR (Ct, Cp, ΔΔCt, krzywa standardowa, wydajność reakcji) 60 min
11.00 Projektowanie eksperymentu
• dobór materiału badawczego
• przygotowanie prób (izolacja kwasów nukleinowych, warunki RT PCR)
• zastosowanie Real-Time do oznaczania ilościowego kwasów nukleinowych – kwantyfikacja względna i bezwzględna 60 min
12.00 Przerwa na kawę 15 min
12.15 Projektowanie eksperymentu - c.d.
• projektowanie starterów i sond – dostępne oprogramowanie komercyjne i darmowe, jak i ile zamawiać, przechowywanie, przygotowanie roztworów roboczych
• dobór genów referencyjnych – standaryzacja wyników
• eksperymenty typu dose-course i time-course 60 min
13.15 Przerwa na obiad 60 min
14.15 Przygotowanie do eksperymentu 15 min
14.30 Część praktyczna – oznaczenie względne (relative quantification) – reakcja multiplex w formacie Dual-color z kompensacją kolorów
W trakcie reakcji:
• Universal Probe Library (UPL)
• Panele Real-Time Ready 105 min
16.15 Interpretacja wyników 15 min
16.30 Sesja troubleshooting w oznaczeniach ilościowych 30 min
17.00 Zakończenie dnia
DZIEŃ 2 | 28 maja 2011 Real-Time w oznaczeniach jakościowych – genotypowanie
9.00 Wprowadzenie do genotypowania
• SNP, mutacje i ich znaczenie
• genotypowanie techniką real-time PCR jako alternatywa dla RFLP i SSCP 30 min
9.30 Projektowanie eksperymentu
• formaty detekcji stosowane w analizie jakościowej
• projektowanie sond HybProbe i Simple Probe – LightCycler Probe Design Software
• gene scanning – High Resolution Melting (HRM)
• genotypowanie typu end-point – sondy hydrolizujące 75 min
10.45 Przerwa na kawę 15 min
11.00 Przygotowanie do eksperymentu 15 min
11.15 Część praktyczna – genotypowanie metodą HRM
W trakcie reakcji – oznaczenie statusu metylacji z zastosowaniem metody HRM 105 min
13.00 Interpretacja wyników 15 min
13.15 Przerwa na lunch 60 min
14.15 Przygotowanie do reakcji genotypowania za pomoca sond (HybProbe /Taqman)
W trakcie reakcji – troubleshooting w reakcjach jakościowych 75 min
15.30 Interpretacja wyników 30 min
16.00 Zakończenie

Formularz zgłoszeniowy na stronie
http://www.cemed.pl/spotkania/2011/rt_pcr/formularz.php