Temat: Warsztaty Real - time PCR 19 - 20 sierpnia 2010 Ponań

warsztaty
Real-time PCR w badaniach hodowli komórkowych
19 – 20 sierpnia 2010 | Poznań | Uniwersytet Medyczny w Poznaniu

Zapraszamy: biologów molekularnych, biotechnologów i diagnostów laboratoryjnych (z zakresu mikrobiologii, genetyki medycznej i poradnictwa genetycznego)


Reakcja łańcuchowa polimerazy DNA z analizą ilości produktu w czasie rzeczywistym (ang. real-time PCR) to jedna z najnowocześniejszych metod analitycznych mających zastosowanie w genetyce, biologii molekularnej, mikrobiologii, wirusologii, onkologii, diagnostyce medycznej i innych pokrewnych dziedzinach. Wykorzystanie sond fluorescencyjnych pozwala nie tylko na monitorowanie przyrostu ilości produktu amplifikacji w każdym cyklu prowadzonej reakcji PCR, a także jego ocenę jakościową. Real-time PCR umożliwia oznaczanie ilości kwasów nukleinowych w materiale badanym oraz wykrywania nawet niewielkich zmian w obrębie amplifikowanych sekwencji, dzięki czemu technika ta jest niezwykle cennym narzędziem znajdującym zastosowanie zarówno w badaniach naukowych jak i w diagnostyce molekularnej.
Prowadzenie hodowli komórkowych in vitro wciąż pozostaje standardem w wirusologii i toksykologii. Technika ta umożliwia precyzyjną kontrolę środowiska oraz ułatwia utrzymanie jednorodności badanych próbek. Jednocześnie problemem jest ocena efektu cytopatycznego oraz potencjalnej kontaminacji hodowli. Rozwiązanie tych zagadnień stanowi system xCELLigence (Roche), umożliwiający pełne monitorowanie w czasie rzeczywistym proliferacji i wzrostu komórek bez konieczności stosowania znaczników takich jak MTT, XTT czy WST-1.

Umiejętności jakie muszą posiadać uczestnicy warsztatów przed przystąpieniem do zajęć:
• elementarne zasady pracy w laboratorium (praca jałowa, obsługa pipet automatycznych)
• przydatna będzie znajomość podstaw PCR
• z warsztatów skorzystają również osoby, które zetknęły się już z technologią real-time PCR (wartością będzie możliwość konsultacji trudniejszych przypadków z doświadczonymi użytkownikami różnych platform sprzętowych)

Umiejętności jakie nabędą uczestnicy warsztatów:
• dobór i zakup sprzętu do prowadzenia reakcji real-time PCR
• projektowanie eksperymentów – projektowanie starterów i sond do oznaczeń ilościowych
i jakościowych techniką real-time PCR
• przeprowadzanie oznaczeń ilościowych (kwantyfikacja względna i bezwzględna)
• przeprowadzanie oznaczeń jakościowych (genotypowanie SNP)
• rozwiązywanie problemów technicznych związanych z analizą wyników i obsługą sprzętu
• w trakcie warsztatów będzie też możliwość konsultacji własnych wyników uczestników kursu
z doświadczonymi użytkownikami różnych platform sprzętowych, praktykami w dziedzinie technik biologii molekularnej)
• podstawy prowadzenia hodowli komórkowych in vitro

Zajęcia praktyczne oparte będą o następujące reakcje, znajdujące zastosowanie w molekularnej diagnostyce medycznej:
• ilościowe oznaczanie poziomu wirusowego DNA z użyciem sond LightCycler w układzie multiplex
• genotypowanie pojedynczo-nukleotydowych polimorfizmów (SNP) za pomocą krzywych topnienia wysokiej rozdzielczości (High Resolution Melting, HRM)
• monitorowanie w czasie rzeczywistym zmian w hodowli komórkowej z użyciem systemu xCELLigence


Prowadzący:
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny

PROGRAM WARSZTATÓW:

DZIEŃ 1 | 19 sierpnia 2010
10.00 Rozpoczęcie warsztatów
10.10 Wykład: Podstawy techniki Real-time PCR
• podstawy techniki Real-Time PCR
• formaty detekcji (sondy, barwniki, fluorochromy)
• nomenklatura związana z techniką Real-Time PCR (Ct, Cp, ΔΔCt, krzywa standardowa, wydajność reakcji)
10.55 Przedstawienie planu zajęć praktycznych (przekazanie protokołów i omówienie ćwiczeń)
11.10 Zajęcia praktyczne: Przygotowanie hodowli komórkowych do zakażenia, ocena hodowli, zakażenie hodowli
13.10 Przerwa na obiad
13.55 Zajęcia praktyczne: Zapoznanie się z urządzeniem do prowadzenia reakcji PCR z możliwością pomiaru w czasie rzeczywistym (zasada działania, aplikacje, software)
14.25 Zajęcia praktyczne: Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Genotypowanie pojedynczonukleotydowych zmian (SNPs) metodą High Resolution Melting (HRM)
15.40 Wykład: Projektowanie sond i primerów
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
16.25 Wykład: Planowanie i optymalizacja ekspermentów real-time PCR
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny
17.00 Zakończenie dnia
DZIEŃ 2 | 20 sierpnia 2010
9.00 Rozpoczęcie warsztatów
9.10 Zajęcia praktyczne: Przygotowanie matrycy do reakcji PCR, czyli izolacja DNA z próbek klinicznych
10.50 Zajęcia praktyczne: Przygotowanie i przeprowadzenie reakcji: Ilościowe badanie obecności wirusa opryszczki (HSV) z wykorzystaniem sond LightCycler oraz analizy krzywych topnienia produktów reakcji PCR
12.05 Wykład: Praktyczne rady dotyczące zakupu i eksploatacji urządzeń real-time PCR
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
13.05 Przerwa na obiad
13.50 Wykład: Zastosowania techniki real-time PCR w diagnostyce medycznej (dr Tomasz Dzieciątkowski)
14.35 Sesja "TROUBLESHOOTING", czyli wspólne rozwiązywanie problemów technicznych
dr Tomasz Dzieciątkowski, Centralny Szpital Kliniczny, Warszawski Uniwersytet Medyczny
dr Marcin Hołysz, Katedra i Zakład Biochemii i Biologii Molekularnej, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
15.20 Zakończenie


INFORMACJE ORGANIZACYJNE
Termin: 19 – 20 sierpnia 2010 r.
Miejsce: Poznań, Uniwersytet Medyczny w Poznaniu
Koszt udziału jednej osoby:
• 1790 zł brutto (w tym 22% VAT)
W punkcie recepcyjnym w dniu spotkania, po okazaniu dowodu wpłaty, otrzymają Państwo oryginał faktury VAT. Na życzenie wystawiamy faktury pro forma.
Koszt uczestnictwa obejmuje: materiały drukowane, catering, Dyplom Uczestnictwa. Cena nie obejmuje kosztu noclegu. Organizator nie prowadzi rezerwacji hotelowych.
Warunki udziału: przesłanie wypełnionego formularza zgłoszeniowego faksem lub elektronicznie z strony internetowej spotkania oraz dokonanie wpłaty po otrzymaniu potwierdzenia udziału, nie później niż w dniu spotkania.
Potwierdzenie zgłoszenia: O przyjęciu zgłoszenia decyduje kolejność. Ilość miejsc ograniczona. Przyjęte zgłoszenie zostanie potwierdzone e-mailem i/lub faksem zawierającym szczegółowe informacje organizacyjne oraz zasady płatności i numer rachunku bankowego Organizatora. Potwierdzenie prześlemy na około 7 dni przed terminem spotkania.
Warunki rezygnacji: Rezygnacja z udziału po 13 sierpnia 2010 r. lub nieobecność na spotkaniu powoduje powstanie zobowiązania pokrycia pełnego kosztu udziału na podstawie faktury wystawionej przez Centrum Edukacji Medycznej CEMED.
Rezygnację z udziału należy przesłać w formie pisemnej na adres cemed@cemed.pl lub faksowej na numer 022 355 85 18 . Anulowanie zgłoszenia potwierdzone zostaje pisemnie przez Organizatora.
Rezygnacja zgłoszona do dnia 13 sierpnia2010 r. (włącznie) nie powoduje obciążeń finansowych. Niedokonanie wpłaty nie jest jednoznaczne z rezygnacją z udziału.
W przypadku niemożności wzięcia udziału w spotkaniu można wyznaczyć zastępstwo zgłoszonej osoby.
Organizator zastrzega sobie prawo do odwołania spotkania, do zmian w programie oraz do zmiany miejsca organizacji spotkania.
Biuro Organizacyjne:
Centrum Edukacji Medycznej CEMED Sp. z o.o., 02-757 Warszawa, ul. Pory 78 lok. 6 p. VI
Tel. (022) 355 85 01 , fax (022) 355 85 18, e-mail: cemed@cemed.pl